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    2. 技術文章

      化學因素對微生物的影響


      實驗原理

       

      常用的化學**劑主要有重金屬及其鹽類,酚、醇、醛等有機化合物以及碘、表面活性劑等。它們的**或抑菌作用主要是使菌體蛋白質變性,或者與酶的—SH基結合而使酶失去活性所致。
        
      本實驗是觀察某些常用的化學藥品在一定濃度下對微生物的致死或抑菌作用,從而了解它們的**或抑菌性能。
        
      為了比較各種化學**劑的**能力,常以石炭酸為標準,即將某一**劑作不同稀釋后,在一定條件下,一定時間內致死全部供試微生物的*高稀釋濃度,與達到同樣效果的石炭酸的*高稀釋度的比值,稱為這種**劑對該種微生物的石炭酸系數(shù)(酚系數(shù))。石炭酸系數(shù)越大,說明該**劑**能力越強。
       

       

      實驗試劑

      牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,2.5%碘酒,0.1%升汞(HgCl2),5%石炭酸,75%酒精,1%來蘇爾,0.25%新潔爾滅, 0.005%龍膽紫,0.05%龍膽紫;

      實驗設備

      培養(yǎng)皿,濾紙片,試管,吸管等。

      實驗材料

      大腸桿菌,白色葡萄球菌(Staphylococcus albus);

      實驗步驟(化學因素對微生物的影響)

       

      1.各種化學藥品的**作用
        (1)用無菌吸管吸取培養(yǎng)18小時的白色葡萄球菌菌液0.2ml于無菌平皿內。
        (2)倒入已溶化并冷至45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基于上述平皿內,充分搖勻,水平放置,待凝。
        (3)將上述已凝固的平皿用記號筆在平皿底劃成八等份,每一等份內標明一種藥物的名稱。
        (4)用無菌鑷子將小圓形濾紙片分別浸入各種藥品中,取出,并在試管內壁上除去多余藥液后,以無菌操作將紙片對號放入培養(yǎng)皿的小區(qū)內,如圖Ⅸ-1。
        (5)將上述放好濾紙片的含菌平皿,倒置于37℃溫室中培養(yǎng)24小時后,取出測定抑菌圈大小,并說明其**強弱。
        
      2.石炭酸系數(shù)的測定
       ?。?)將5%(1:20)的石炭酸液按表Ⅸ-1配成不同濃度,每管5ml。
       ?。?)將待測藥物(來蘇爾)先配成1:20的原液,再按表Ⅸ-2配成不同濃度,每管 5ml。
       
             

         (3)取肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基30管,1—15管標明石炭酸的5種濃度,每種濃度3管,每3管分5、10、15分鐘處理,16—30管標明來蘇爾的5種濃度,同樣每種濃度3管,每3管分5、10、15分鐘處理。
         (4)在上述不同濃度的石炭酸和來蘇爾溶液中,各接入0.5ml大腸桿菌液,搖勻。注意每管自接種時起在5、10、15分鐘,用同一接種環(huán)從各管內取一環(huán)接入上述已標記的液體培養(yǎng)基試管中。
       
             

       ?。?)置37℃溫室中培養(yǎng) 48小時,觀察并記錄生長情況。生長者溶液混濁,以“ ”表示;不生長者溶液澄清,以“-”表示。
       ?。?)計算系數(shù)值 找出在5分鐘生長,而在10分鐘和15分鐘均不生長的石炭酸及來蘇爾的*大稀釋度,計算二者的比值。例如石炭酸在10分鐘內殺死大腸桿菌的*大稀釋度是1:70,來蘇爾是1:250,則來蘇爾的石炭酸系數(shù)為250/70=3.6。

      結果 
      (1)各種化學藥品對白色葡萄球菌的致死能力

             
        
      (2)石炭酸系數(shù)的測定和計算

             

       
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